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ELISA试剂盒常见问题处理
点击次数:152 发布时间:2019-05-30

出现问题

出现问题的原因

解决办法

曲线
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
OD值不正常
 
 
 
 
 
 
 

试剂盒未回温

试剂盒回温到25℃

 

 

温度控制不好

控制正确温度

 

 

孵育时间不准确

控制孵育时间

 

 

洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加

洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干

 

 

阳光直射,对着风直接吹

避风避光

 

 

酶标仪的波长错误

酶标仪的波长450nm

 

 

抗体的稀释错误

正确的稀释抗体

 

 

水质问题

矿泉水代替

 

 
白   板
 
 

洗涤液配制错误

正确的配制洗涤液

 

 

少加液体(抗体、酶标记物、A液、B液)

正确的步骤加液体

 

 

错加液体

 

 

 
无 梯 度
 
 

标准品也污染

换标准品点板

 

 

OD值不正常

控制温度时间在做一次

 

 

人为点板

/

 

线 性 不 好
 

OD值不正常

控制温度时间在做一次

 

 

人为点板

/

回  收  率
 
 
 
 
 
 

 
空白管阳性高
 
 

样本本身就是阳性样本

换阴性样本做回收率

 

 

空白管在实验中被污染

实验中防止交叉污染

 

 

水质原因

用娃哈哈矿泉水代替

 

 
 
偏  高
 
 
 
 

添加量不准确

精准的添加量

 

 

添加浓度不适合

添加合适的浓度

 

 

取液吹干量多

准确的取液吹干

 

 

取到其它相层液体

取需用相吹干

 

 

复溶液未稀释或加入量少

正确的稀释复溶液

 

 
偏  低
 
 
 

添加量不准确

精准的添加量

 

 

添加浓度不适合

添加合适的浓度

 

 

取液吹干量少

准确的取液吹干

 

 

复溶液稀释错误或加入量多

正确的稀释复溶液

 
 
假阴、阳性
 
 
 
 
 

水质原因

点复溶液验证

用娃哈哈矿泉水代替

 

实验操作原因
 
 
 

吸取到其它相吹干

准确的取液吹干

 

 

离心不彻底

延长离心时间

 

 

样本的污染

更换样本

 

 

乳化未处理完全

温浴(70℃)处理乳化现象

 

仪器试剂原因
 

离心管未清洗干净

正确的洗涤器具

 

 

有机溶剂的影响

做试剂空白看影响结果

 

衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质)

更换衍生化试剂

 

与曲线好坏相关

保证曲线的正常

 
 
金标检测(T)线颜色较浅
 
 

尿液pH偏碱性

用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。

 

尿样滴加过多

重新测定,尿样按照说明书,控制在2滴

 

尿液过于混浊

将尿液离心后,取上清液重新测定

 
 
金标质控(C)线不出现
 
 
 
 
 
 

检测卡由于高温、受潮等原因失效

尿样需要重新检测。

 

过了有效期失效。

该批号的金标应丢弃处理,尿液需要重新检测
 

 

操作过程中检测卡没有平放,导致液体样品直接冲过检测区

尿样需要重新检测,且检测卡平放于桌面上再加样。

 

尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质(比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等)

该尿液的检测结果无效

金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线

金标卡上的划痕;胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹;

该检测卡结果不可信,尿液需要重新检测。

实验重复性不好

操作人员的不一致,取样的不一致,样本数量的多少,加样时间的长短,洗涤条件不一致,加样量不一致

尽量保持的实验一致性
 

分析软件的使用
 

不能设置和保存

正确的设置和保存

 

如何判断曲线的好坏和分析结果

正确的判断曲线的好坏和分析结果


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