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ELISA 实验标本采集、处理和保存
点击次数:131 发布时间:2019-07-03

一、ELISA 实验中血清的采集、处理和保存

1、 真空采血针采集 2 ml 新鲜血液,加入无菌试管中。
2、 采血后室温静置 1 小时。
3、 将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10 min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。 大部分 ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以 HRP 为标记的 ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性过氧化物酶,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法 ELISA 中可使本底加深。

二、ELISA 实验中血浆的采集、处理和保存

1、 真空采血针采集 2 ml 新鲜血液,加入无菌试管中。
2、 按 1:9 加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30 分钟内于冰上分离血浆以 减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集)。
3、 将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 5 min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。
4、 取上清.分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。
5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。 请注意指标说明书上对于抗 凝血剂是否有特殊要求,建议使用 EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。 注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂 EDTA, 抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。

三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存

1、 采集尿液样本 500ul,加入无菌试管中。
2、 将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10 min,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。

3、取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。

4、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存

1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中
2、将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10 min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。 3、取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存

1、采集细胞培养上清液 500ul,加入无菌试管中。
2、将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 10 min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。 3、取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

六、ELISA 实验中细胞裂解液的采集、处理和保存(需要测蛋白浓度)

1、 取细胞培养板或细胞悬液,用 PBS(PH7.2-7.4)洗涤细胞培养板 1-2 次。
2、 通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂(裂解液),使细胞破坏并放出细胞内成份。
3、 将采集血液用离心机 4℃,2500rpm 离心 20 min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉 淀。 4、取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

七、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存

1、 10% 水合氯醛溶液,腹腔麻醉。
2、 打开腹腔,另取 10 ml 注射器行下腔静脉采血,尽可能将血放尽。
3、 在冰面上对左肺进行肺灌洗。取 37℃ 生理盐水 5 ml,分三次灌洗:2 ml、1.5 ml、1.5 ml 灌洗。回收率在 70% 以上。
4、 将肺泡灌洗液用离心机 4℃,1500rpm 离心 10 min。
5、 取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。
6、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

八、ELISA 实验中关节滑液的采集、处理和保存

1、 口腔关节:患者取坐位,常规消毒后,作皮下及关节后区局部浸润麻醉。然后嘱患者大 张口,采用装有 2 ml 生理盐水的注射器(5 号针头)作关节上腔 穿刺,髁后进针,针尖方向斜向前、内、上,抵达关节结节后斜面后稍后退,回抽如发现有淡黄色液体,即表明已进入关节上腔,注入 2 ml 生理盐水,反复注入、 回抽五次。 膝骨关节滑液:无菌穿刺取得关节液。
2、 将关节液用离心机 4℃,1500rpm 离心 15 min,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀
3、 取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。
4、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。

九、 ELISA 实验中各类组织匀浆的采集、处理和保存(需要测蛋白 浓度)

1、 采集组织,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,剔除附属的结缔组 织,称取组织块。
2、 用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86% 冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应 该是组织块重量的 9 倍,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织 的小烧杯放入冰水中)。
3、 匀浆的方式有多种: a) 手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的 1/3 匀浆介质或生理盐水 冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下 端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8 分钟),充分研碎,使组织匀浆化。 b) 机器匀浆:用组织捣碎机 10000~15000r/min 上下研磨制成 10% 组织匀浆,也可用 内切式组织匀浆机制备(匀浆时间 10 秒/次,间隙 30 秒,连续 3~5 次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
4、 将制备好的 10% 匀浆用离心机 4℃,3000rpm 离心 15 min,将离心好的匀浆留上清,弃 下面沉淀。
5、 取上清。 分装冻存备用, 2-8℃ 下,可放置保存 24-48 小时; -20℃ 下,可放置保存 1 个月; -70℃ 下,可放置保存 6 个月。
6、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种 ELISA 测定。 


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