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如何作好软琼脂实验分析
点击次数:147 发布时间:2019-08-01

软琼脂(soft agar)实验一般用来检测细胞的集落形成能力。现在这种方法越来越多的用于分离癌细胞,也可以用来确认癌细胞是否具有癌化特性,为进一步做肿瘤小鼠移植模型奠定理论基础。该方法看似简单,但如果细节掌握不好,往往导致实验失败或数据缺乏说服力。如果你曾经在这个实验上栽了跟头,请不妨在如下几个方面进行尝试:

1.要确保在整个实验过程中所使用的琼脂处于完全液体状态(>80℃),尤其是在做基底时,如果琼脂凝固过快会导致基底不均一;

2. 做琼脂基底是应避免产生小气泡,一旦有小气泡产生,应该立即将气泡赶走;

3. 应使用2倍浓度的培养基,并加入20%FBS 和2%的P/S;

4. 在制备上层时,混合液体需要有顺序,一般为在同一个移液管中先吸取液态琼脂,再吸取同体积的2倍浓度的培养基,最后在吸取2倍体积的细胞悬液,这样既可以保证琼脂不立即固化,又可以有效避免细胞因温度过高而烫死;

5. 因为该实验周期较长,为避免过度蒸发而导致琼脂裂解,需要保证小环境持久湿润,一般可在六孔板或培养皿下面垫上三到四层湿润的薄纸。


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