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ELISA试剂盒得到了广泛的应用
点击次数:94 发布时间:2019-08-20
     ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。下面分析ELISA试剂盒操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法。
 
    目前用于纺织退浆的淀粉酶主要ELISA试剂盒,淀粉糖化酶(β-淀粉酶),胰淀粉酶,麦芽淀粉酶等。我国主要采用耐热性强的枯草杆菌淀粉酶即α-淀粉酶(枯草杆菌),β淀粉酶属于一种细菌淀粉酶是由地衣芽孢杆菌经液体深层发酵,提取等工序精制而成的浅褐色液体生物制剂,广泛应用于啤酒等生产中。它对温度有较强的适应能力。它并非为单一为单一淀粉酶,还含有其它酶组分。后者含量较少,但它们的存在有利于去除织物上的油脂,蛋白质等杂质。
 
    实验显示,ELISA试剂盒经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显着的增多,人正常肝细胞这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,人白介素ELISA试剂盒而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
 
    ELISA试剂盒于动物(唾液、胰脏等)、植物(麦芽、山萮菜)及微生物。微生物的酶几乎都是分泌性的。此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子,也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。淀粉酶既作用于直链淀粉,亦作用于支链淀粉,无差别地随机切断糖链内部的α-1,4-链。因此,其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失,zui终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主,此外,还有少量麦芽三糖及麦芽糖,其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精,在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。另一方面在分解支链淀粉时,除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外,还生成分支部分具有α-1,6-键的α-极限糊精(又称α-糊精)。一般分解限度以葡萄糖为准是35-50%,但在细菌的淀粉酶中,亦有呈现高达70%分解限度的(zui终游离出葡萄糖);
 
    一、选择试剂
 
    选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
 
    二、加样
 
    大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒可能原因:
 
    1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
 
    2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
 
    3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
 
    大鼠成纤维细胞生长因子ELISA试剂盒解决办法:
 
    1) 标本为血清:zui好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
 
    2) 加样后及时放入孵箱。
 
    3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
 
    4) 如果采用AT或其他全自动加样,zui好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
 
    5) 标本较多时,请分批操作。
 
    常见ELISA试剂盒实验技术要点,不看就没了!
 
    我公司技术专员对解析出其实验技术要点,下面一起来看看吧。
 
    1. 准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等;
 
    2. 根据检测标本数量确定所需试剂的量;
 
    3. 按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂;
 
    4. 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备,尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
 
    实验中为了确定*佳信号和*背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
 
    标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
 
    一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
 
    为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。

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