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如何看懂流式结果图
点击次数:191 发布时间:2019-08-30

流式结果图有4种类型,分别为:1. 直方图  2.散点图  3. 等高线图  4.密度图

下面一一为大家介绍

1. 直方图(Histograms)

a.横坐标代表荧光信号或散射光信号相对强度,可以是线性或对数坐标。

 

 

 

 

 

b.纵坐标一般是相对细胞数。

直方图适用于分析处理周期(如下图)

 

 

直方图分析数据注意事项:

① 不能比较不同标记之间的表达量。如一号样本单标记CD133、二号样本单标记CD44,那么CD133与CD44表达量不能用直方图进行比较。

② 直方图的形状(直方图的高度及宽度)取决于仪器的类型、处理软件和样本

③检测目的细胞非常少(即检测的细胞在一个细胞群体中所占的比例特别少),因此需要统计大量的数据,直方图将会将该稀有细胞覆盖,如下图散点图中的P2门为CD16阴性群体,但在直方图中则几乎看不出来,所以此时散点图为展示数据方式。

 

 

2. 散点图(Dot plots)

散点图是双变量图的基本图形,相对于单参数直方图其分析通量更高,同时也能更好观察到较小比例细胞群,参见直方图注意事项2,另外散点图中设门后,可以赋予门控颜色,便于观察门控细胞群在其他图中的分布,比如下图只赋予淋巴细胞门红色,则可以观察到淋巴细胞中在散射光图中的分布。

 

 

 

 

 

横坐标和纵坐标都是光信号,十字门左下角是双阴性群,右下角和左上角是单阳群,右上角是双阳群。散点图上的每一个点可以代表某一个细胞的信息。

 

但是散点图在显示足够多events下的细胞分群上缺乏细节,如下图,流式仪器记录的events达到50000以上时,CCR7的阳性群与阴性群已经没有明显界限,但当用等高线图或者密度图时,明显改善点图存在的缺点。

 

3.密度图(Density plot)

密度图不仅能够表示一个标记的表达水平,还能显示给定区域中事件的相对数量(密度)。有三种密度图。密度度、斑马线图、伪彩图。选择自己一种喜欢的应用

 

 

 

 

4.等高线图(Contour plots)

等高线图是另一显示数据密度的形式。该图使用等高线显示数据的相对强度。等高线的每条线包含events的百分比由所用软件的等高线图决定。单纯的等高线图不能显示低密度的群体颗粒或者异常值,比较好的策略为等高线图与点图结合起来使用,比如下图左边为点图,中间为等高线图,左边为等高线加点图。

 

 

 

 

分析,建议用散点图用直方图不能说错,但这需要在没有自发荧光或自发荧光低、荧光渗漏调整到位的情况下。而在实际检测中,自发荧光总是难以避免,更不用说现在多色流式中荧光渗漏对通道的干扰。

通过下面这个图可以明显看出,在直方图上,自发荧光造成的拖尾,使得你的阴阳性分界位置难以确定,即使GFP样本能够形成双峰,但实际上双峰分界位置同时包括了自发荧光假阳性信号、阳性群弱表达信号,这两部分信号数量一样的时候,这个位置恰好相互抵消,但如果不一样的,这个比例就不准确了,如果改用下面的散点图,用不规则门(如下面的梯形门),就可以准确圈出阳性群,呈现更真实的比例:

 

综上,不同类型的流式图各有优缺点,适用于不同类型的检测。


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